承接 PCR檢測實(shí)驗室 無(wú)菌操作室 設計裝修

一、PCR實(shí)驗室四要素

1、試劑準備區

         用于試驗試劑的準備。該區域為正壓，目的是防止污染物質(zhì)溢入。該區域內部又可分為3個(gè)區域：普通提取試劑的準備區、PCR試劑準備區和PCR主反應液準備區。在普通提取試劑的準備區內準備一些樣品核酸提取時(shí)所需的裂解液、提取液等；PCR試劑準備區用于PCR試劑的制備和保存。例如準備引物、探針等PCR試劑。為了防止交叉污染，避免反復冷凍和解凍，試劑存貯溶液應該被平均為小的工作體積，儲存在這個(gè)房間以備后用：PCR主反應液準備區將進(jìn)行主反應混合液(除了樣品。所有PCR所需試劑的混合)添加到PCR管的操作。重要提示：不能將其它房間的材料(包括擴增、模板和目標核酸或陽(yáng)性對照、供應品、或設備)帶進(jìn)試劑準備區。

2、樣品準備區

         該區域無(wú)壓力設置要求。該區域是用于對樣品進(jìn)行分樣，將樣品進(jìn)行研磨、粉碎、勻漿的區域。由于在這些粉碎、研磨和勻漿處理過(guò)程中會(huì )產(chǎn)生氣溶膠，因此，存在陽(yáng)性樣品污染后續操作的可能性。該區域與后面的區域應嚴格隔離，應放在與后面的三個(gè)區域隔開(kāi)的獨立的房間中。在樣品準備區內還可設立一個(gè)專(zhuān)用的封閉區或房間用于樣品的接收和儲存。這個(gè)房間可以放置冰箱用于樣品儲存，應該和樣品準備區其它區域隔離開(kāi)。樣品準備區域的人員不得進(jìn)入試劑準備區。

3、核酸提取區

         核酸提取區是進(jìn)行樣品核酸提取的區域。該區域為負壓，目的是防止核酸溢出造成污染。樣品準備區又包括從樣品中進(jìn)行核酸提取和純化的區域以及將核酸加到包含PCR主反應混合液管中的操作區域。添加完樣品后，PCR管的蓋子要盡可能快地蓋好。使用PCR板和膠蓋時(shí)，陽(yáng)性對照和含目標序列的樣品要與待測樣本分開(kāi)操作，以避免模板添加時(shí)造成交叉污染

4、擴增和產(chǎn)品檢測區

         該區域是用來(lái)進(jìn)行PCR擴增和PCR分析的。PER儀放置在這個(gè)區域。房間保持負壓，目的是防止核酸溢出。在該區域人員一定要一直穿戴工作服和手套，在離開(kāi)房間前脫去，防止擴增子污染其它地點(diǎn)。所有用于擴增和產(chǎn)品檢測的設備要用于這個(gè)房間。PCR分析]二作也設置在該區域，例如：酶切、測序、克隆等，但實(shí)驗室應盡可能把這些活動(dòng)分隔在不同區域或不同房間。以降低擴增產(chǎn)物的污染風(fēng)險。如果沒(méi)有條件在該區域設立負壓，此區域必須建立排風(fēng)裝置。

二、PCR實(shí)驗室的功能分區

1、基因擴增實(shí)驗室的設計通常有四大分區：試劑儲存和準備區、標本制備區、核算擴增區、產(chǎn)物分析區。這四個(gè)分區原本就不需要連接在一起，且在物理空間上必須是獨立的，各區域無(wú)論在空間上還是在使用中，應處于的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。

2、PCR實(shí)驗室的功能區分布：

① 基因擴增實(shí)驗室的用房分區可分散布置，可集中布置；集中布置的分布原則是依次排列、獨立分區；4個(gè)基本分區可根據需要進(jìn)行遞增/減。如下為PCR實(shí)驗室功能分區的常見(jiàn)布局

② 建筑上，緩沖間是阻隔空氣交換的首要措施

③ 進(jìn)入工作區域應嚴格按照單一方向進(jìn)行，即：試劑儲存和準備區——標本制備區——核算擴增區——產(chǎn)物分析區

三、PCR實(shí)驗室類(lèi)型

         PCR實(shí)驗室可以是分散形式，也可以是組合形式。完成一組PCR實(shí)驗，通常應經(jīng)過(guò)試劑配制、樣品處理、核酸擴增及產(chǎn)物分析四個(gè)實(shí)驗過(guò)程，若實(shí)驗工藝需要，還應增加樣品粉碎過(guò)程。

①分散形式PCR實(shí)驗室：

         所謂分散形式PCR實(shí)驗室，是指完成上述實(shí)驗過(guò)程的實(shí)驗用房彼此相距較遠，呈分散布置形式。對于這種布置形式的PCR實(shí)驗室建設設計，由于各個(gè)實(shí)驗之間不易相互干擾，因此無(wú)需特殊條件要求。

②組合形式PCR實(shí)驗室：

         所謂組合形式, 是指完成基因擴增四個(gè)實(shí)驗過(guò)程的實(shí)驗用房相鄰布置，組成獨立實(shí)驗區域的形式。對于組合形式PCR實(shí)驗室的建設設計，由于各個(gè)實(shí)驗間集中布置，容易造成相互干擾，因此，對總體布局以及屏障系統具有一定的要求。各室在入口處設緩沖間，以減少室內外空氣交換。

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